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发明

一种基于Tn7-like转座子构建特异性文库的方法及应用2024

2024-04-16 07:21:37 发布于四川 1
  • 申请专利号：CN202311832574.0
  • 公开（公告）日：2024-04-12
  • 公开（公告）号：CN117867663A
  • 申请人：杭州杰毅生物技术有限公司
摘要：本发明公开了一种基于Tn7‑like转座子构建特异性文库的方法：(1)针对待检测病原体，在基因组保守区域内，针对一个以上的保守序列，设计多个PAM序列为NGTN的特异性target DNA和多个sgRNA，多个target DNA按照正向target DNA和反向target DNA交替设置；(2)将插入片段LE‑接头A‑接头B‑RE构建重组载体；(3)重组载体在CRISPR‑Cas系统中，与核酸样本进行转座反应，将插入片段插入保守序列中；CRISPR‑Cas系统包括纯化后的cas12K蛋白、tnsB、tnsC、tniQ蛋白、多个sgRNA、重组载体、核酸样本；(4)进行PCR扩增，得到两端分别为接头A和接头B的DNA片段，扩增产物纯化得到特异性文库。特异性文库可用于检测病原体，本发明可检测多个靶点，检测灵敏度高，排除了PCR非特异性扩增带来的假阳性影响，有良好的应用前景。

专利内容

(19)国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 117867663 A (43)申请公布日 2024.04.12 (21)申请号 202311832574.0 C12N 15/74 (2006.01) C40B 40/08 (2006.01) (22)申请日 2023.12.28 C12R 1/32 (2006.01) (71)申请人 杭州杰毅生物技术有限公司 地址 311100 浙江省杭州市余杭区良渚街 道金昌路2073号3幢4号楼401室 (72)发明人 韩序　王庆伟　董晓静　乔燕楠　 王珺　 (74)专利代理机构 浙江千克知识产权代理有限 公司 33246 专利代理师 黎双华 (51)Int.Cl. C40B 50/06 (2006.01) C12Q 1/689 (2018.01) C12Q 1/6806 (2018.01) C12Q 1/6869 (2018.01) 权利要求书2页 说明书11页 序列表（电子公布） 附图1页 (54)发明名称 一种基于Tn7-like转座子构建特异性文库 的方法及应用 (57)摘要 本发明公开了一种基于Tn7‑

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