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发明

Flag免疫噬菌体展示抗体库的构建方法、Flag抗体scFv1及其应用

2023-05-24 12:54:27 发布于四川 1
  • 申请专利号：CN202211279558.9
  • 公开（公告）日：2023-05-16
  • 公开（公告）号：CN116121882A
  • 申请人：翌圣生物科技（上海）股份有限公司
摘要：本发明提供一种KLH‑Flag免疫噬菌体展示抗体库的构建方法，其步骤包括：(1)用KLH‑Flag蛋白免疫新西兰大白兔，提取淋巴细胞的总RNA，逆转录成cDNA；(2)利用PCR技术扩增重链可变区和轻链可变区片段并拼接成scFv基因；(3)构建pCANTAB5E‑2sfi1‑scFv重组质粒，电转化至TG1感受态细胞，构建噬菌体单链抗体库；(4)特异性富集噬菌体单链抗体库，从中筛选出阳性克隆。并公开了最终得到应用的单克隆抗体氨基酸序列。本发明通过噬菌体展示抗体库技术筛选得到高亲和力的兔源单链抗体,该抗体对Flag蛋白的亲和力高，特异性强,该抗体可用于制备Anti‑Flag亲和凝胶的抗体和可用于WB检测带有Flag标签的蛋白等。

专利内容

(19)国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 116121882 A (43)申请公布日 2023.05.16 (21)申请号 202211279558.9 (22)申请日 2022.10.19 (71)申请人 翌圣生物科技（上海）股份有限公司 地址 200120 上海市浦东新区天雄路166弄 1号楼402室 (72)发明人 易红飞　向蜀州　朱倩静　 (74)专利代理机构 苏州根号专利代理事务所 (普通合伙) 32276 专利代理师 朱华庆 (51)Int.Cl. C40B 50/06 (2006.01) C12N 15/13 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01) C07K 16/00 (2006.01) C07K 1/22 (2006.01) 权利要求书2页 说明书13页 序列表（电子公布） 附图5页 (54)发明名称 Flag免疫噬菌体展示抗体库的构建方法、 Flag抗体scFv1及其应用 (57)摘要 本发明提供一种KLH‑Flag免疫噬菌体展示 抗体库的构建方法，其步骤包括：(1)用KLH‑Flag 蛋白免疫新西兰大白兔，提取淋巴细胞的总RNA， 逆转录成cDNA；(2)利用PCR技术扩增重链可变区 和轻链可变区片段并拼接成scFv基因 ；(3)构建 pCANTAB5E‑2sfi1‑scFv重组质

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