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发明

酶法靶序列随机sgRNA文库的制备方法

2023-05-05 09:57:12 发布于四川 12
  • 申请专利号：CN202111586539.6
  • 公开（公告）日：2024-12-27
  • 公开（公告）号：CN114293264A
  • 申请人：翌圣生物科技（上海）股份有限公司
摘要：本发明提供了一种酶法靶序列随机sgRNA文库的制备方法，其特征在于其步骤包括：采用随机切口酶Nt.CviPII对样本DNA目标序列的PAM区域进行切口；含BbsI酶切位点的接头磁珠连接片段化的DNA；BbsI切割释放DNA；随机引物延伸；连接含MmeI酶切位点的sgRNA骨架；MmeI切割释放原间隔区域；连接T7启动子序列；扩增获得含T7启动子的sgRNA文库模板；体外转录获得sgRNA文库。本发明的酶法靶序列随机sgRNA文库的制备方法，可以一次性制备随机覆盖目标区域的所有sgRNA组，具有成本低、制作简单、覆盖均一、偏好性小、不受靶序列长度限制和无需大批量设计sgRNA等优点，在靶基因的捕获和去除上具有重要的应用价值。

专利内容

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 114293264 A (43)申请公布日 2022.04.08 (21)申请号 202111586539.6 (22)申请日 2021.12.21 (71)申请人 翌圣生物科技（上海）股份有限公司 地址 200120 上海市浦东新区天雄路166弄 1号楼402室 (72)发明人 宋东亮　刘倩　黄成　侯策　王嫚　 孙睿　江翱　陈晶晶　曹振　 (74)专利代理机构 苏州根号专利代理事务所 (普通合伙) 32276 代理人 朱华庆 (51)Int.Cl. C40B 50/06 (2006.01) C40B 40/06 (2006.01) C12N 15/113 (2010.01) 权利要求书1页 说明书7页 附图4页 (54)发明名称 酶法靶序列随机sgRNA文库的制备方法 (57)摘要 本发明提供了一种酶法靶序列随机sgRNA文 库的制备方法，其特征在于其步骤包括：采用随 机切口酶Nt.CviPII对样本DNA目标序列的PAM区 域进行切口；含BbsI酶切位点的接头磁珠连接片 段化的DNA；BbsI切割释放DNA；随机引物延伸；连 接含MmeI酶切位点的sgRNA骨架；MmeI切割释放 原间隔区域；连接T7启动子序列；扩增获得含T7 启动子的sgRNA文库模板；体外转录获得sgRNA文 库。本发明的酶法靶序列随机sgRNA文库的制备 方法，可以一次性制备随机覆盖目标区域的所有 s

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