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发明

一种猫冠状病毒S蛋白mRNA的体外转录系统及其构建方法2025

2024-03-02 07:52:38 发布于四川 0
  • 申请专利号：CN202310428659.6
  • 公开（公告）日：2025-05-09
  • 公开（公告）号：CN117604031A
  • 申请人：龙岩学院
摘要：本公开提供了一种猫冠状病毒S蛋白mRNA的体外转录系统及其构建方法，包括如下步骤:对猫冠状病毒S蛋白mRNA序列进行修饰和优化；将设计好的S蛋白基因片段连接体外转录载体，构建pGEM‑S重组质粒，转入大肠杆菌大量培养，并提取质粒进行线性化处理及胶回收，以获得体外转录的DNA模板；通过体外转录反应获得FCoV S mRNA，并进行加帽及纯化。用同样的技术路线构建了pGEM‑EGFP载体，体外转录成EGFP mRNA；以EGFP mRNA作为报告基因进行细胞转染实验，并在体外转染多种细胞系以验证IVT‑mRNA系统。本发明人首次构建了猫冠状病毒S蛋白mRNA的体外转录系统，可以在细胞水平上高效表达目的蛋白，并可以在不同细胞系中应用，为后期制备猫冠状病毒mRNA疫苗提供了基础。

专利内容

(19)国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 117604031 A (43)申请公布日 2024.02.27 (21)申请号 202310428659.6 (22)申请日 2023.04.20 (71)申请人 龙岩学院 地址 364000 福建省龙岩市新罗区东肖北 路1号 (72)发明人 林炜明　张晓东　董波　项明萌　 钟晓威　张梅玲　 (74)专利代理机构 泉州市立航专利代理事务所 (普通合伙) 35236 专利代理师 卢清华 (51)Int.Cl. C12N 15/85 (2006.01) C12N 15/66 (2006.01) C07K 14/165 (2006.01) 权利要求书2页 说明书6页 序列表（电子公布） 附图8页 (54)发明名称 一种猫冠状病毒S蛋白mRNA的体外转录系统 及其构建方法 (57)摘要 本公开提供了一种猫冠状病毒S蛋白mRNA的 体外转录系统及其构建方法，包括如下步骤:对 猫冠状病毒S蛋白mRNA序列进行修饰和优化；将 设计好的S蛋白基因片段连接体外转录载体，构 建pGEM‑S重组质粒，转入大肠杆菌大量培养，并 提取质粒进行线性化处理及胶回收，以获得体外 转录的DNA模板；通过体外转录反应获得FCoV S  mRNA ，并进行加帽及纯化。用同样的技术路线构

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