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发明

一种定量miRNA的测序文库制备和分析方法

2023-07-21 07:19:18 发布于四川 0
  • 申请专利号：CN202010367164.3
  • 公开（公告）日：2023-07-18
  • 公开（公告）号：CN112126986A
  • 申请人：苏州京脉生物科技有限公司
摘要：为了解决miRNA的精确定量问题，本发明提供一种定量miRNA的测序文库制备和分析方法，其主要步骤包括在RNA两端连接衔接子RA5与RA3；使用反转录引物RT Primer获得DNA第一链并对溶液进行不同倍数的稀释；使用Primer1和Primer2进行PCR并对扩增产物中目的DNA片段进行切胶回收；使用Illumina测序平台进行测序；使用生物信息学工具分析下机数据并使用算法校正miRNA的表达量。本发明设计的包含随机标签序列的衔接子RA5能有效去除PCR扩增带来的重复序列，实现对miRNA进行更为精准的表达定量；本发明提出的稀释法以及对应的算法，有效避免了因miRNA的不同拷贝连接上同样的随机标签序列而造成表达量低估的情况，因此进一步提高了定量的准确性。

专利内容

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 112126986 A (43)申请公布日 2020.12.25 (21)申请号 202010367164.3 (22)申请日 2020.04.30 (71)申请人 苏州京脉生物科技有限公司 地址 215000 江苏省苏州市吴江区盛泽镇 西二环路1188号中国盛泽纺织科技园 10幢208室 (72)发明人 李华　沈益行　郭子文　谢跃华　 (74)专利代理机构 江苏昆成律师事务所 32281 代理人 刘尚轲 (51)Int.Cl. C40B 50/06(2006.01) C12Q 1/6806(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) 权利要求书2页 说明书10页 序列表14页 附图1页 (54)发明名称 一种定量miRNA的测序文库制备和分析方法 (57)摘要 为了解决miRNA的精确定量问题，本发明提 供一种定量miRNA的测序文库制备和分析方法， 其主要步骤包括在RNA两端连接衔接子RA5与 RA3；使用反转录引物RT Primer获得DNA第一链 并对溶液进行不同倍数的稀释；使用Primer1和 Primer2进行PCR并对扩增产物中目的DNA片段进 行切胶回收；使用Illumina测序平台进

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