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发明

一种高通量筛选microRNA靶基因的文库、构建方法及其用途

2023-06-02 12:46:34 发布于四川 0
  • 申请专利号：CN202210831187.4
  • 公开（公告）日：2023-05-30
  • 公开（公告）号：CN116180243A
  • 申请人：德阳市人民医院
摘要：本发明公开了一种高通量筛选microRNA靶基因的文库、构建方法及其用途。构建方法包括提取待测样本的总RNA，纯化mRNA；逆转录第一链/第二链，获得全长mRNA；将全长mRNA逆转录产物第一链和第二链酶切，断裂得到DNA双链片段；利用DNA连接酶在断裂的双链DNA两端分别加5’‑端和3’‑端接头，得到第一连接产物；高保真酶扩增，得到高保真扩增的DNA产物；Nhe1/Kpn1双酶切高保真扩增的DNA产物，得到双酶切的文库DNA；连接双酶切重组载体及所述双酶切的文库DNA；转导HB101；构建/扩增文库。本发明构建的文库可以对全基因片段进行扫描，可以很好兼顾高通量筛选和验证直接的真实相互作用。

专利内容

(19)国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 116180243 A (43)申请公布日 2023.05.30 (21)申请号 202210831187.4 (22)申请日 2022.07.15 (71)申请人 德阳市人民医院 地址 618000 四川省德阳市泰山北路一段 173号 (72)发明人 宋春娇　袁成良　 (74)专利代理机构 成都行之专利代理事务所 (普通合伙) 51220 专利代理师 马碧娜 (51)Int.Cl. C40B 50/06 (2006.01) C12Q 1/6806 (2018.01) C12N 15/70 (2006.01) C12N 15/65 (2006.01) C12N 15/113 (2010.01) 权利要求书1页 说明书8页 序列表（电子公布） 附图10页 (54)发明名称 一种高通量筛选microRNA靶基因的文库、构 建方法及其用途 (57)摘要 本发明公开了一种高通量筛选microRNA靶 基因的文库、构建方法及其用途。构建方法包括 提取待测样本的总RNA，纯化mRNA ；逆转录第一 链/第二链，获得全长mRNA；将全长mRNA逆转录产 物第一链和第二链酶切，断裂得到DNA双链片段； 利用DNA连接酶在断裂的双链DNA两端分别加5’‑ 端和3’‑端接头，得到第一连接产物；高保真酶

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