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一种含特异性分子标签的外泌体微量RNA文库构建方法2024

2024-03-11 07:19:12 发布于四川 0
  • 申请专利号:CN202211090307.6
  • 公开(公告)日:2024-03-08
  • 公开(公告)号:CN117661122A
  • 申请人:上海思路迪生物医学科技有限公司
摘要:本发明公开了一种含特异性分子标签的外泌体微量RNA文库构建方法。该方法为:采用包含T7启动子序列、通用序列和标签序列的靶向基因特异性引物作为逆转录引物,对外泌体RNA进行逆转录1,获得cDNA;以获得的cDNA为模板,在T7RNA聚合酶的作用下进行转录反应;以转录产物RNA作为模板进行逆转录2及第一PCR反应,逆转录2和第一PCR反应于同一体系内进行,采用前述的靶向基因特异性引物,且反应体系中加入无机焦磷酸酶;将第一PCR产物纯化,纯化的产物采用含有UDI的通用序列引物进行第二PCR反应,然后纯化第二PCR产物,得到文库。本发明解决了外泌体短片段RNA的靶向基因建库成功率低的问题,并且提高了突变检出的灵敏度。

专利内容

(19)国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 117661122 A (43)申请公布日 2024.03.08 (21)申请号 202211090307.6 (22)申请日 2022.09.07 (71)申请人 上海思路迪生物医学科技有限公司 地址 201100 上海市闵行区新骏环路158号 2幢304室、404室、402室 (72)发明人 蔡瑶 赵小玉 马跃 任青措  张亚楠 谢正华  (74)专利代理机构 上海硕力知识产权代理事务 所(普通合伙) 31251 专利代理师 王法男 (51)Int.Cl. C40B 50/06 (2006.01) 权利要求书2页 说明书13页 序列表(电子公布) 附图3页 (54)发明名称 一种含特异性分子标签的外泌体微量RNA文 库构建方法 (57)摘要 本发明公开了一种含特异性分子标签的外 泌体微量RNA文库构建方法。该方法为:采用包含 T7启动子序列、通用序列和标签序列的靶向基因 特异性引物作为逆转录引物,对外泌体RNA进行 逆转录1,获得cDNA;以获得的cDNA为模板,在 T7RNA聚合酶的作用下进行转录反应;以转录产 物RNA作为模板进行逆转录2及第一PCR反应,逆 转录2和第一PCR反应于同一体系内进行,采用前 述的靶向基因特异性引物,且反应体系中加入无 机焦磷酸酶;将第一PCR产物纯化,纯化的产物

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