低频引入突变的酶切打断建库方法和试剂盒

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(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 113832549 A (43)申请公布日 2021.12.24 (21)申请号 202111296374.9 (22)申请日 2021.11.03 (71)申请人 纳昂达（南京）生物科技有限公司 地址 210031 江苏省南京市江北新区华康 路142号南京生物医药谷加速器三期 A01栋南侧3-4层 (72)发明人 曲燕　胡玉刚　吴强　 (74)专利代理机构 北京康信知识产权代理有限 责任公司 11240 代理人 白雪 (51)Int.Cl. C40B 50/06 (2006.01) C12Q 1/6869 (2018.01) 权利要求书2页 说明书10页 附图5页 (54)发明名称 低频引入突变的酶切打断建库方法和试剂 盒 (57)摘要 本发明公开了一种低频引入突变的酶切打 断建库方法和试剂盒。其中，该酶切打断建库方 法包括DNA酶切片段化和补平加A、接头连接、PCR 扩增和文库纯化的步骤，其中，DNA酶切片段化和 补平加A步骤中，通过控制常温DNA聚合酶的用量 控制反复切割和链置换。应用本申请的技术方 案，除了保证打断的效率和稳定性，同时也避免 了由于打断引入大量的突变导致影响酶切打断 在NGS测序过程中的应用，做到打断水平和超声 相当的水平，使本申请的酶切打断能够在临床检 测过程中得到很好的应用。 A 9 4 5 2 3 8 3 1 1 N C CN