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发明

靶序列随机sgRNA全覆盖组的制备方法

2023-05-05 09:44:27 发布于四川 0
  • 申请专利号：CN202111573668.1
  • 公开（公告）日：2022-04-05
  • 公开（公告）号：CN114277447A
  • 申请人：翌圣生物科技（上海）股份有限公司
摘要：本发明提供了一种靶序列随机sgRNA全覆盖组的制备方法，使用限制酶对目标序列的PAM区域进行切割；连接上sgRNA骨架；通过sgRNA骨架上的旁切活性限制酶位点进行靶向原间隔区域的序列获取；连接T7启动子；扩增获得带T7启动子的sgRNA文库；体外转录获得靶序列sgRNA文库。还公开了核糖体RNA的sgRNA文库制备方法以及去除RNA文库中核糖体RNA的方法，和在宿主基因组去除人全基因组的方法。本发明方法具有成本低、制作简单、覆盖均一、偏好性小、不受靶序列长度限制和无需大批量设计sgRNA等优点。

专利内容

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 114277447 A (43)申请公布日 2022.04.05 (21)申请号 202111573668.1 (22)申请日 2021.12.21 (71)申请人 翌圣生物科技（上海）股份有限公司 地址 200120 上海市浦东新区天雄路166弄 1号楼402室 (72)发明人 宋东亮　刘倩　黄成　侯策　王嫚　 孙睿　江翱　陈晶晶　曹振　 (74)专利代理机构 苏州根号专利代理事务所 (普通合伙) 32276 代理人 朱华庆 (51)Int.Cl. C40B 50/06 (2006.01) C40B 40/06 (2006.01) C12N 15/113 (2010.01) C12N 9/22 (2006.01) 权利要求书2页 说明书9页 附图8页 (54)发明名称 靶序列随机sgRNA全覆盖组的制备方法 (57)摘要 本发明提供了一种靶序列随机sgRNA全覆盖 组的制备方法，使用限制酶对目标序列的PAM区 域进行切割；连接上sgRNA骨架；通过sgRNA骨架 上的旁切活性限制酶位点进行靶向原间隔区域 的序列获取；连接T7启动子；扩增获得带T7启动 子的sgRNA文库；体外转录获得靶序列sgRNA文 库。还公开了核糖体RNA的sgRNA文库制备方法以 及去除RNA文库中核糖体RNA的方法，和在宿主基 因组去除人全基因组的方法。本发明方法具有成

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