一种用于挖掘新型耐药基因的高库容功能宏基因组文库的构建方法及应用

专利内容

(19)国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 116377600 A (43)申请公布日 2023.07.04 (21)申请号 202310149018.7 (22)申请日 2023.02.22 (71)申请人 华南农业大学 地址 510000 广东省广州市天河区五山路 483号 (72)发明人 刘雅红　陈东瑞　陈彩萍　苏恬恬　 孙坚　廖晓萍　 (74)专利代理机构 广州正明知识产权代理事务 所(普通合伙) 44572 专利代理师 张丽 (51)Int.Cl. C40B 50/06 (2006.01) C40B 40/08 (2006.01) C12Q 1/6806 (2018.01) 权利要求书1页 说明书6页 (54)发明名称 一种用于挖掘新型耐药基因的高库容功能 宏基因组文库的构建方法及应用 (57)摘要 本发明属于生物基因检测技术领域，公开了 一种用于挖掘新型耐药基因的高库容功能宏基 因组文库的构建方法及应用；针对插入片段钝化 后的平末端与载体的平末端连接效率低问题，使 用T4多聚核苷酸激酶；针对载体模板残留问题， 使用DpnI限制性内切酶进行模板消化；针对载体 自我连接问题，用小牛肠碱性磷酸酶 (CIP)处理 线性载体DNA。本发明方法所得功能基因组文库 的平均插入片段大小为7kbp，范围为5至8kbp，总 文库大小为10 .25Gbp。插入频率范围89％至 96％，库容比报道的使用pZE21MCS表达载体的任